Suivi de la maladie résiduelle par les mutations IDH1/2 dans les Leucémies Aiguës Myéloïdes par LNA-RQ-PCR
Mots-clés :
LAM, MRD, LNA-RQ-PCR, gènes IDH1/2.Résumé
Résumé
Prérequis : Avec l'importance croissante de la maladie résiduelle minimale (MRD) et la découverte récente des mutations des gènes IDH dans les leucémies aiguës myéloïdes (LAM), la quantification de ce marqueur moléculaire fournit la possibilité de contrôler la progression de maladie et l'efficacité thérapeutique dans les LAM de l’adulte.
Objectif : Notre but est d'évaluer la MRD en utilisant pour la première fois les mutations géniques IDH1 et IDH2 chez 15 patients présentant une LAM.
Méthodes : Nous avons examiné les mutations R132 IDH1, R140 IDH2 et R172 IDH2 par amplification et séquençage direct et nous les avons quantifiées en utilisant, pour la première fois, des amorces reverses modifiées par un analogue d’acide nucléique ou LNA. Une bonne sensibilité a été obtenue. Les taux de MRD obtenus par LNA-RQ-PCR ont été utilisés pour tracer la cinétique d'évolution de la maladie au cours du suivi des patients.
Résultats : Les résultats de IDH1/2 ont été comparés avec ceux de la mutation du gène NPM1 et de la surexpression du gène WT1 montrant une cohérence des taux de MRD dans 7/11 cas. Pour les cas restant, la technique de séquençage direct et l'essai de fusion à haute résolution (HRM) ont confirmé les résultats de quantification au diagnostic, mais pas pour les échantillons résiduels.
Conclusion : Quelques optimisations sont nécessaires pour améliorer l'amplification de l’allèle muté. La LNA-RQ-PCR peu coûteuse, pourrait alors être la méthode de choix utilisable dans un petit laboratoire pour l'évaluation de la MRD dans les LAM en utilisant les mutations IDH1/2.
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Références
Shen Y, Zhu Y, Fan X et al. Gene mutation patterns and their prognostic impact in a cohort of 1185 patients with acute myeloid leukemia. Blood 2011;118:5593-03.
Döhner K, Döhner H. Molecular characterization of acute myeloid leukemia. Haematologica 2008;93:978-82
Paschka P, Schlenk RF, Gaidzik VI et al. IDH1 and IDH2 mutations are frequent genetic alterations in acute myeloid leukemia and confer adverse prognosis in cytogenetically normal acute myeloid leukemia with NPM1 mutation without FLT3 internal tandem duplication. J Clin Oncol 2010;28:3636-43.
Gross S, Cairns RA, Minden MD et al. Cancer-associated metabolite 2- hydroxyglutarate accumulates in acute myelogenous leukemia with isocitrate dehydrogenase 1 and 2 mutations. J Exp Med 2010;207:339- 44.
Marcucci G, Maharry K, Wu Y-Z et al. IDH1 and IDH2 gene mutations identify novel molecular subsets within de novo cytogenetically normal acute myeloid leukemia: a Cancer and Leukemia Group B study. J Clin Oncol 2010;28:2348-55.
Marcucci G, Haferlach T, Döhner H. Molecular genetics of adult acute myeloid leukemia: prognostic and therapeutic implications. J Clin Oncol 2011;29:475-86
Yan H, Parsons W, Jin G et al. IDH1 and IDH2 Mutations in Gliomas. N Engl J Med 2009;360:765-73.
Abbas S, Lugthart S, Kavelaars FG et al. Acquired mutations in the genes encoding IDH1 and IDH2 both are recurrent aberrations in acute myeloid leukemia: prevalence and prognostic value. Blood 2010;116:2122-6.
Parsons DW, Jones S, Zhang X et al. An integrated genomic analysis of human glioblastoma multiforme. Science 2008;321:1807-21.
Chan SM, Majeti R. Role of DNMT3A, TET2, and IDH1/2 mutations in pre-leukemic stem cells in acute myeloid leukemia. Int J Hematol 2013;98:648-57.
Boissel N, Nibourel O, Renneville A et al. Prognostic impact of isocitrate dehydrogenase enzyme isoforms 1 and 2 mutations in acute myeloid leukemia: a study by the Acute Leukemia French Association group. J Clin Oncol 2010;28:3717-23.
Kern W, Schoch C, Haferlach T, Schnittger S. Monitoring of minimal residual disease in acute myeloid leukemia. Crit Rev Oncol Hematol 2005;56:283-09.
Shook D, Coustan-Smith E, Ribeiro RC, Rubnitz JE, Campana D. Minimal residual disease quantification in acute myeloid leukemia. Clin Lymphoma Myeloma 2009;9:1-9.
Patel KP, Ravandi F, Ma D et al. Acute myeloid leukemia with IDH1 or IDH2 mutation: frequency and clinicopathologic features. Am J Clin Pathol 2011;135:35-45.
Rockova V, Abbas S, Wouters BJ et al. Risk stratification of intermediaterisk acute myeloid leukemia: integrative analysis of a multitude of gene mutation and gene expression markers. Blood 2011;118:1069-76.
Chou W-C, Lei W-C, Ko B-S et al. The prognostic impact and stability of Isocitrate dehydrogenase 2 mutation in adult patients with acute myeloid leukemia. Leukemia 2011;25:246-53.
Veedu RN, Wengel J. Locked nucleic acid oligonucleotides toward clinical applications. Med Chem Nucleic Acids 2011;335-48.
Giusto DA Di, King GC. Strong positional preference in the interaction of LNA oligonucleotides with DNA polymerase and proofreading exonuclease activities : implications for genotyping assays. Nucleic Acids Res 2004;32:1-8.
Denys B, Housni H El, Nollet F, Verhasselt B, Philippe J. A Real-Time Polymerase Chain Reaction assay for rapid , sensitive , and specific quantification of the JAK2V617F mutation using a locked nucleic acidmodified oligonucleotide. J Mol Diagnostics 2010;12:512-9.
Gabert J, Beillard E, van der Velden VHJ et al. Standardization and quality control studies of “real-time” quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction of fusion gene transcripts for residual disease detection in leukemia - a Europe Against Cancer program. Leukemia 2003;17:2318-57.
Abdelhamid E, Preudhomme C, Helevaut N et al. Minimal residual disease monitoring based on FLT3 internal tandem duplication in adult acute myeloid leukemia. Leuk Res 2012;36:316-23.
Krypuy M, Newnham GM, Thomas DM, Conron M, Dobrovic A. High resolution melting analysis for the rapid and sensitive detection of mutations in clinical samples: KRAS codon 12 and 13 mutations in nonsmall cell lung cancer. BMC Cancer 2006;6:295.
Taylor CF. Mutation scanning using high-resolution melting. Biochem Soc Trans 2009;37:433-7.
Erali M, Wittwer CT. High resolution melting analysis for gene scanning. Methods 2010;50:250-61.
Scholl S, Theuer C, Scheble V et al. Clinical impact of nucleophosmin mutations and Flt3 internal tandem duplications in patients older than 60 yr with acute myeloid leukaemia. Eur J Haematol 2008;80:208-15.
Candoni A, Tiribelli M, Toffoletti E et al. Quantitative assessment of WT1 gene expression after allogeneic stem cell transplantation is a useful tool for monitoring minimal residual disease in acute myeloid leukemia. Eur J Haematol 2008;82:61-8.
Cilloni D, Gottardi E, De Micheli D et al. Quantitative assessment of WT1 expression by real time quantitative PCR may be a useful tool for monitoring minimal residual disease in acute leukemia patients. Leukemia 2002;16:2115-21.
Huang Q, Wang G, Huang J, Zhang B, Fu W. High sensitive mutation analysis on KRAS 2 gene using LNA / DNA chimeras as PCR amplification blockers of wild-type alleles. Mol Cell Probes 2010;24:376- 80.
Zeng Y, Li D, Wang W et al. Establishment of real time allele specific locked nucleic acid quantitative PCR for detection of HBV YIDD (ATT) mutation and evaluation of its application. PLoS One 2014;9:1-10.
